摘要:目的 探讨角蛋白4(KRT4)过表达对喉癌细胞活力、增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。方法 构建KRT4过表达质粒，转染TU177喉癌细胞。实验共分 3 组:CON组(空白对照组，未转染)，Oe-NC组(阴性对照组，转染对照质粒空载体)，Oe-KRT4组(目的基因实验组，转染KRT4过表达质粒)。通过RT-qPCR法及Western blot法验证转染效率，通过CCK-8法、平板克隆实验、细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验和流式细胞术检测KRT4过表达对喉癌细胞活力、增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。结果 RT-qPCR法及Western blot法结果提示Oe-KRT4组KRT4 mRNA和KRT4蛋白表达水平较CON组与Oe-NC组显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。CCK-8法结果提示Oe-KRT4组细胞活力较CON组与Oe-NC组显著减弱，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。平板克隆实验结果提示Oe-KRT4组克隆数显著低于CON组与Oe-NC组，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。细胞划痕实验结果提示Oe-KRT4组迁移率显著低于CON组与Oe-NC组，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。Transwell小室侵袭实验结果提示Oe-KRT4组细胞穿膜数显著低于CON组与Oe-NC组，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。流式细胞术结果提示Oe-KRT4组细胞凋亡率较CON组与Oe-NC组显著增加，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。结论 KRT4过表达能显著抑制喉癌细胞的活力、增殖、迁移和侵袭，并促进喉癌细胞的凋亡，因此KRT4有望成为喉癌治疗的潜在生物标志物。

摘要:目的 观察白细胞介素6抗体（IL-6）/蛋白酪氨酸激酶2抗体（JAK2）/信号传导和转录激活因子3抗体（STAT3）对口腔鳞状细胞癌（简称口腔鳞癌）细胞生物学行为的影响。方法 对口腔鳞癌细胞系进行慢病毒转染敲低IL-6基因，设立两组对照，一组为未干预组，另一组为空白载体组。通过CCK8实验和克隆形成实验检测IL-6对口腔鳞癌细胞增殖情况的影响，通过流式细胞术检测细胞周期变化，通过Transwell实验检测IL-6对口腔鳞癌细胞侵袭和迁移能力的影响。利用实时荧光定量PCR以及Western blot方法检测口腔鳞癌细胞中IL-6基因表达下调后其下游通路基因p-STAT3、p-JAK2与肿瘤血管新生有关的蛋白VEGFA、细胞周期调控蛋白Cyclin B1、细胞基质沉积相关蛋白MMP2、细胞凋亡抑制蛋白Survivin、上皮向间质转化相关蛋白Snail和E-Cadherin的表达情况。结果 敲低IL-6的口腔鳞癌细胞与对照组细胞比较，增殖率受到明显抑制，差异具有统计学意义（F=13.06，P=0.006）；敲低IL-6的口腔鳞癌细胞中G1期细胞百分比下降，G2期细胞百分比上升，差异具有统计学意义（F=5.53，P<0.05）；敲低IL-6的口腔鳞癌细胞与对照细胞比较，侵袭能力和迁移能力明显下降，差异具有统计学意义（F=23.59/53.11，P<0.01）；口腔鳞癌细胞IL-6表达下调后，JAK2、STAT3、VEGFA、Cyclin B1、MMP2、Snail表达随之明显下降，而E-Cadherin表达显著增加，差异具有统计学意义（P均<0.05）。结论 IL-6基因敲低后可明显抑制口腔鳞癌细胞的生长与增殖能力，可能诱导细胞G2期阻滞；抑制STAT3、JAK2、VEGFA、Cyclin B1、MMP2、Snail和Survivin表达，促进E-Cadherin蛋白表达。

摘要:目的 探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）对鼻咽癌细胞CNE1的增殖与侵袭的作用机制。方法 收集2018年6月—2019年6月手术切除病灶的56例经病理确诊鼻咽癌患者的肿瘤组织作为鼻咽癌组织的研究对象，男40例，女16例；均为初次确诊鼻咽癌，并且尚未经过放/化疗干预。另同期选取进行治疗的50例慢性鼻咽炎组织作为比对，男38例，女12例。用免疫组化分别检测鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎组织中GRP78的表达。CNE1细胞实验分为对照组（CNE1鼻咽癌细胞常规培养，不进行外界干预）、NC组（CNE1鼻咽癌细胞转染LvGFP-Puro-GRP78-NC后，常规培养）、Sh-GRP78组（CNE1鼻咽癌细胞转染LvGFP-Puro-GRP78后，常规培养），转染完成48 h后，可在荧光显微镜下观察到各组细胞内的绿色荧光蛋白（GFP），PCR检测各组细胞中GRP78的mRNA的表达。Brdu标记检测各组细胞的增殖能力，Transwell小室检测各组细胞的侵袭能力，小管形成实验检测各组细胞的血管形成能力；双荧光素酶实验分析GRP78和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9的作用，Western blot检测各组细胞GRP78、MMP-2和MMP-9表达水平。结果 与慢性鼻咽炎组织相比，GRP78在鼻咽癌组织中的表达明显升高，Sh-GRP78组CNE1细胞增殖、侵袭和迁移能力、血管形成能力明显增强，差异均具有统计意义（P<0.05）。双荧光素酶实验结果显示MMP-2和MMP-9是GRP78作用的靶基因。与对照组相比，Sh-GRP78组细胞中GRP78、MMP-2和MMP-9的表达水平明显上升，差异均具有统计意义（P<0.05）。结论 GRP78在鼻咽癌组织中存在高表达的现象，并且GRP78靶向调控MMP-2和MMP-9的表达增强CNE1细胞的增殖、侵袭与血管新生的能力。

摘要:DOI:10.11798/j.issn.·鼻咽癌专栏·基金项目：第目的探讨SGK1在鼻咽癌（NPC）中的表达及其对肿瘤细胞存活、增殖和迁移的影响。方法采用免疫组织检测NPC组织和慢性鼻咽炎组织中SGK1的表达。使用lipofectamine 2000瞬时转染NPC细胞系HNE1，Western blot检测siRNA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中的SGK1表达，筛选SGK1沉默效果最佳的NPC细胞。CCK8法检测转染细胞的增殖能力，Transwell细胞迁移实验检测SGK1沉默对细胞迁移能力的影响，流式细胞术检测其凋亡水平。结果NPC组织中SGK1的表达明显高于慢性鼻咽炎组织。Western blot结果显示转染SGK1 siRNA后HNE1细胞中SGK1蛋白水平明显下降。SGK1基因沉默后，HNE1细胞表现出较强的细胞增殖和迁移抑制作用。此外，沉默SGK1后，HNE1细胞的凋亡率增加。结论SGK1在NPC组织中呈高表达。沉默SGK1基因可抑制NPC细胞系HNE1的增殖、迁移和存活能力。

摘要:目的探讨变异性浆细胞瘤异位１（ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｍａｖａｒｉａｎｔｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ１，ＰＶＴ１）抑制鼻咽癌细胞增殖的分子机制。方法构建特异性的shRNA PVT1慢病毒载体，包装慢病毒（LV/shRNA PVT1）并转导鼻咽癌C6661细胞，检测Smad4的表达；LV/shRNA PVT1转导C6661细胞24 h后转染Smad4 siRNA，通过细胞计数、四甲基偶氮唑蓝（MTT）法及流式细胞术分析沉默Smad4对LV/shRNA PVT1介导的鼻咽癌细胞生长及细胞周期的影响，并检测细胞周期相关调控因子的表达。结果下调PVT1后鼻咽癌细胞中Smad4的表达升高，而用siRNA沉默Smad4表达后，结果显示，抑制Smad4表达可阻断LV/shRNA PVT1介导的细胞生长抑制效应，同时细胞周期结果显示，与对照组相比，shRNA PVT1/Smad4 siRNA组细胞G1期比例降低，S期和G2期比例升高，并且CDK4、CDK6及cmyc的mRNA水平升高。结论下调PVT1可抑制鼻咽癌细胞增殖，并升高Smad4的表达，沉默Smad4可阻断shRNA PVT1对鼻咽癌细胞增殖的抑制效应；提示Smad4可能是PVT1作用的一个下游靶基因，下调PVT1可能通过Smad4抑制鼻咽癌细胞增殖。

摘要: 目的探讨miR375在鼻咽癌患者中表达的临床意义及其对鼻咽癌细胞的影响。方法收集67例鼻咽癌组织标本和53例慢性鼻咽炎症组织标本，采用qRTPCR检测组织标本和鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、C6661及人永生化鼻咽上皮细胞株（NP69）中miR375的表达水平；分别转染miR375的模拟物或抑制物，CCK8法检测细胞的增殖，Transwell实验检测细胞的迁移；生物信息学靶基因预测miR375的靶基因，并经双荧光素酶及蛋白质印迹法（Western blotting）验证靶基因。结果鼻咽癌组织中miR375表达水平与慢性鼻咽炎症组织相比明显下调（P<0.05）；miR375的表达水平与患者的临床分期、区域淋巴结受累情况以及肿瘤大小有关（P<0.05），但与患者年龄、性别、吸烟史、分化程度及组织类型无关(P>0.05)；鼻咽癌细胞与NP69相比较，miR375的表达水平均显著低于NP69（P<0.05）；miR375过表达后C6661细胞增殖、迁移显著低于慢性鼻咽炎-模拟物组（P<0.05），Nemo样激酶（Nemolike kinase,NLK）的表达下调。miR375抑制后CNE1细胞增殖、迁移显著高于慢性鼻咽炎-抑制物组（P<0.05），miR375对NLK具有直接靶向调控作用。结论miR375在鼻咽癌中呈低表达，并与患者的临床分期、区域淋巴结受累情况以及肿瘤大小有关，其可能是通过下调靶基因NLK，从而抑制鼻咽癌的增殖及迁移。

摘要:目的探讨miR98对鼻咽癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响及其可能机制。方法利用脂质体介导的miR98 mimic（及阴性对照）转染鼻咽癌CNE1和CNE2细胞，CCK8检测其体外增殖能力的改变，划痕愈合及Transwell侵袭小室实验检测鼻咽癌细胞的体外迁移及侵袭潜能变化，生物信息学软件预测miR98可能的靶基因，并经双荧光素酶及Western blotting验证靶基因。结果MiR98过表达能抑制鼻咽癌CNE1和CNE2细胞的体外生长增殖、迁移及侵袭能力；miR98对MTDH具有直接靶向调控作用。结论本研究表明miR98能够靶向MTDH调控鼻咽癌细胞株的体外生长增殖及侵袭能力。

摘要:目的 探讨重组人内皮抑素（rh-endostatin，rh-ES）对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡的影响。方法 分别以25、50、100、200、400 μg/ml的rh-ES体外处理人鼻咽癌细胞株CNE2，同时设空白对照组和细胞对照组。利用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测不同浓度和时间rhES作用下的细胞增殖状态；流式细胞仪检测细胞周期及凋亡；透射电镜观察CNE2细胞超微结构的变化。结果 ① MTT检测显示rhES（25~400 μg/ml）能抑制CNE2细胞的增殖，不同浓度的rhES对人鼻咽癌细胞株CNE2具有不同程度的生长抑制作用，且存在时间剂量效应，以400 μg/ml rhES 作用72 h后抑制效果最为显著，各浓度组相比差异具有统计学意义。②流式细胞仪检测结果发现与CNE2细胞对照组相比，rhES实验组处于细胞周期G0/G1期的细胞明显增多，细胞凋亡率增加（P<0.05）。③电镜观察，rhES实验组CNE2细胞出现凋亡特征，细胞和细胞器皱缩，核染色质边集碎裂，核膜消失。结论 rh-ES能显著抑制鼻咽癌细胞CNE2细胞的增殖，并具有时间剂量依赖性，其主要机制可能为诱导细胞凋亡，调整细胞周期分布。