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    • shRNA-hIAP2增强CNE-1鼻咽癌细胞对放射敏感性的实验研究

      2013, 19(5):393-398.

      关键词:人凋亡抑制蛋白|鼻咽癌细胞|RNA沉默|放射敏感性
      摘要 (795)HTML (0)PDF 1.10 K (1615)收藏

      摘要:目的构建人凋亡抑制蛋白(human inhibitor of apoptosis protein2,hIAP-2)的shRNA,靶向抑制hIAP2基因联合放疗,探讨其对CNE1鼻咽癌细胞株放射敏感性的影响。方法首先采用MTT法确定最佳放射剂量;再构建4条hIAP-2shRNA沉默片段并用脂质体法转染CNE1细胞,最后采用实时荧光定量PCR(QPCR)和免疫印迹法(Western blot, WB)筛选出最佳沉默shRNA序列;用最佳沉默shRNA序列转染CNE1细胞,分别设置转染放射线照射组与未转染放射线照射组,采用实时定量PCR和WB检测hIAP2的基因及其蛋白表达;流式细胞术测细胞凋亡,transwell测细胞侵袭能力。结果MTT法明确4 Gy为最佳放射剂量;QPCR和WB检测结果显示4条hIAP2shRNA均能有效抑制hIAP-2 mRNA及蛋白表达(P<0.05),以hIAP-2shRNA2沉默效果最显著(P<0.05);QPCR和WB检测结果显示转染hIAP2shRNA2后照射组与未转染hIAP2shRNA2照射组的CNE1细胞中hIAP-2基因与蛋白表达比较,差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示转染hIAP-2shRNA2后照射组比未转染hIAP-2shRNA2照射组凋亡率差异具有统计学意义(P<0.05);transwell检测结果显示转染hIAP2shRNA2后照射组与未转染hIAP-2shRNA2照射组侵袭能力差异具有统计学意义(P<0.05)。结论转染hIAP-2基因沉默后放射可增加鼻咽癌细胞凋亡率,降低其侵袭能力,能够起到放疗增敏作用。

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