摘要:目的 研究血清亲环素A(CypA)联合凋亡抑制蛋白(Arc)水平对重型颅脑损伤(STBI)患者预后的预测价值。方法 选取于2018年3月—2020年12月收治的STBI患者140例。根据GCS评分结果将患者分为预后不良组(110例)和预后良好组(30例)。收集患者的基本资料，包括性别、年龄、身高、体质指数(BMI)、生命体征、治伤原因、院内心肺复苏、插管比例等，收集患者24 h内首次临床检查结果。比较两组患者各参数的差异并进行单因素和多因素分析，评估影响因素对STBI患者预后的预测价值。结果 两组患者收缩压、舒张压、院内插管、院内心肺复苏、凝血酶时间、血浆凝血酶原时间、CypA和Arc等组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示，CypA和Arc是STBI患者预后不良的危险因素(P<0.05)。采用Spearman分析法对CypA和Arc与预后的相关性进行分析，结果显示，CypA和Arc与预后均呈正相关(r=0.512，P<0.001；r=0.602，P<0.001)。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估CypA和Arc表达水平对STBI患者预后评估的效能，结果显示，STBI患者CypA表达水平的曲线下面积(AUC)为0.858(95%CI：0.810~0.905，P<0.001)，Arc表达水平的AUC为0.839(95%CI：0.785~0.894，P<0.001)，联合预测的AUC为0.971(95%CI：0.949~0.992，P<0.001)。结论 血清CypA联合Arc水平对STBI患者预后有一定的预测价值。

摘要:目的 探讨角蛋白4(KRT4)过表达对喉癌细胞活力、增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。方法 构建KRT4过表达质粒，转染TU177喉癌细胞。实验共分 3 组:CON组(空白对照组，未转染)，Oe-NC组(阴性对照组，转染对照质粒空载体)，Oe-KRT4组(目的基因实验组，转染KRT4过表达质粒)。通过RT-qPCR法及Western blot法验证转染效率，通过CCK-8法、平板克隆实验、细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验和流式细胞术检测KRT4过表达对喉癌细胞活力、增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。结果 RT-qPCR法及Western blot法结果提示Oe-KRT4组KRT4 mRNA和KRT4蛋白表达水平较CON组与Oe-NC组显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。CCK-8法结果提示Oe-KRT4组细胞活力较CON组与Oe-NC组显著减弱，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。平板克隆实验结果提示Oe-KRT4组克隆数显著低于CON组与Oe-NC组，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。细胞划痕实验结果提示Oe-KRT4组迁移率显著低于CON组与Oe-NC组，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。Transwell小室侵袭实验结果提示Oe-KRT4组细胞穿膜数显著低于CON组与Oe-NC组，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。流式细胞术结果提示Oe-KRT4组细胞凋亡率较CON组与Oe-NC组显著增加，差异具有统计学意义(P＜0.000 1)。结论 KRT4过表达能显著抑制喉癌细胞的活力、增殖、迁移和侵袭，并促进喉癌细胞的凋亡，因此KRT4有望成为喉癌治疗的潜在生物标志物。

摘要:目的 探讨下调内质网相关降解蛋白(Derlin-1)对鼻咽癌CNE-2Z细胞株化疗敏感性的作用及机制。方法 收集10例鼻咽癌患者鼻咽癌组织及癌旁正常组织并通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测组织中Derlin-1 mRNA含量；本实验分组：空白对照组(control组)、阴性对照组(NC组)、敲低组(si-Derlin-1组)。RT-qPCR法检测鼻咽癌Derlin-1 mRNA的表达；采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同顺铂浓度时3组细胞的增殖；Annexin V-FITC/PI双染法检测顺铂浓度为5 μmol/L时3组细胞的凋亡率；Transwell检测顺铂浓度为5 μmol/L时3组细胞的侵袭迁移能力；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法、Western blot法检测Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 mRNA及蛋白相对表达量。结果 RT-qPCR结果显示，鼻咽癌癌组织中Derlin-1 mRNA相对表达量较癌旁正常组织显著减少，差异具有统计学意义(P<0.05)；si-Derlin-1组Derlin-1 mRNA较control组、NC组明显下降，差异具有统计学意义(P<0.05)MTT法结果显示，与control组、NC组相比，si-Derlin-1组细胞增殖率明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05)；Annexin V-FITC(绿色荧光)/PI(红色荧光)双染法结果可见，当DDP浓度为5 μmol/L时，si-Derlin-1组细胞凋亡率为(29.65±2.35)%，较control组(13.24±1.43)%、NC组(15.09±1.32)%明显升高，差异具有统计学意义(P<0.05)；Transwell实验结果显示，当DDP浓度为5 μmol/L时，si-Derlin-1组细胞迁移率、侵袭率分别为(20.15±2.20)%、(22.33±3.5)%，较对照组(100±1.3)%、(99±2.43)%以及NC组(96.72±3.22)%、(94.44±1.21)%明显降低，差异具有统计学意义(F迁移率=1080.610，P=0.000)、(F侵袭率=848.590，P=0.000)；RT-qPCR结果显示，相比control组、NC组，si-Derlin-1组凋亡抑制因子Bcl-2 mRNA的表达量下降，凋亡诱导因子Bax mRNA表达量上调；si-Derlin-1组迁移相关因子MMP2与MMP9 mRNA相对表达量明显下降，差异均具有统计学意义(P均<0.05)；Western blot结果显示，相比control组、NC组，si-Derlin-1组凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达量下降，凋亡诱导蛋白Bax表达量上调；si-Derlin-1组迁移相关蛋白MMP2与MMP9蛋白相对表达量明显下降，差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论 Derlin-1在鼻咽癌中表达上调，下调Derlin-1可提高鼻咽癌CNE-2Z细胞化疗敏感性，机制可能与促进细胞凋亡、抑制迁移有关。

摘要:DOI:10.11798/j.issn.·鼻咽癌专栏·基金项目：第目的探讨SGK1在鼻咽癌（NPC）中的表达及其对肿瘤细胞存活、增殖和迁移的影响。方法采用免疫组织检测NPC组织和慢性鼻咽炎组织中SGK1的表达。使用lipofectamine 2000瞬时转染NPC细胞系HNE1，Western blot检测siRNA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中的SGK1表达，筛选SGK1沉默效果最佳的NPC细胞。CCK8法检测转染细胞的增殖能力，Transwell细胞迁移实验检测SGK1沉默对细胞迁移能力的影响，流式细胞术检测其凋亡水平。结果NPC组织中SGK1的表达明显高于慢性鼻咽炎组织。Western blot结果显示转染SGK1 siRNA后HNE1细胞中SGK1蛋白水平明显下降。SGK1基因沉默后，HNE1细胞表现出较强的细胞增殖和迁移抑制作用。此外，沉默SGK1后，HNE1细胞的凋亡率增加。结论SGK1在NPC组织中呈高表达。沉默SGK1基因可抑制NPC细胞系HNE1的增殖、迁移和存活能力。

摘要:目的通过体外实验，研究吲哚3甲醇（indole3carbinol，I3C）对Hep2喉癌细胞的抑制增殖和促进凋亡及机制。方法根据I3C浓度分组，用不同浓度的I3C即 0、100、200 μM 和300 μM作用于Hep2喉癌细胞株0、24、48和72 h后，测定Hep2细胞增殖能力。测定不同浓度I3C处理Hep2喉癌细胞株48 h后细胞凋亡率。测定不同浓度I3C处理Hep2喉癌细胞株后PI3K/Akt通路相关蛋白的表达情况。结果当I3C浓度增加时，Hep2喉癌细胞株的增殖能力明显减弱，凋亡率显著增加，同时监测到PI3K/Akt通路相关蛋白的表达水平降低。结论在体外实验，I3C可以有效地抑制Hep2喉癌细胞的生长，同时诱导凋亡，抑制PI3K/Akt信号通路可能是其作用机制。

摘要: 目的探讨EBV膜潜伏蛋白1(latent membrane protein 1，LMP1)基因过表达后对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNFrelated apoptosisinducing ligand，TRAIL)凋亡诱导作用和凋亡信号传导的影响。方法利用脂质体介导的pGL6LMP1上调LMP1低表达的TRAIL抵抗性鼻咽癌细胞CNE1中LMP1的表达；通过MTT比色法、流式细胞术观察LMP1过表达后对CNE1细胞TRAIL敏感性的影响；流式细胞术、Western blot、线粒体膜电位检测观察LMP1过表达后对死亡受体表达、细胞内外凋亡信号通路激活、线粒体膜电位改变的影响。结果死亡受体荧光标记后流式细胞术检测发现CNE1和CNE1LMP1之间细胞膜蛋白死亡受体4（death receptor 4,DR4），死亡受体5（death receptor,DR5）表达差异无统计学意义（P>0.05）。Western blot结果显示TRAIL(100 ng/ml)分别作用2、4、6、12 h后，CNE1细胞中caspase8 p43/p41，p18亚单位蛋白和caspase3 p17，p10亚单位蛋白表达明显高于CNE1LMP1细胞，而Bcl2相互作用域死亡激动蛋白的截短形式（truncated form of Bid,tBid）和caspase9 p35亚单位蛋白表达无明显改变，且两个细胞株间也无明显区别。JC1线粒体膜电位检测法结果显示TRAIL干预后，线粒体膜电位无明显改变，且两个细胞株间也无明显区别。结论LMP1过表达抑制TRAIL对鼻咽癌细胞的凋亡诱导作用和其细胞外凋亡信号的传导，提示LMP1是通过抑制细胞外信号通路激活诱导鼻咽癌细胞发生TRAIL抵抗。

摘要:目的探讨紫草萘醌衍生物（SYUNZ4）［3，11bis(2hydroxyethansulfanyl)6isohexeny lnaphthazarin］联合放射治疗对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞生长的协同抑制作用及放疗增敏机制。方法人NPC高分化鳞状细胞癌细胞株CNE1和低分化鳞状细胞癌细胞株CNE2随机分为空白对照组、单纯SYUNZ4组、单纯放射治疗组及SYUNZ4联合放射线照射组共4组。单纯放射治疗组仅给予剂量4 Gy放射线照射，单纯SYUNZ4组仅给予最大非细胞毒性剂量的SYUNZ4液培养，SYUNZ4联合放射线照射组在给予4 Gy的放射线照射后，立即给予最大非细胞毒性剂量的SYUNZ4液培养；然后应用流式细胞术检测SYUNZ4诱导CNE1和CNE2细胞凋亡的作用及其对细胞周期的影响。结果SYUNZ4对CNE1和CNE2细胞均具有增殖抑制作用，且其作用呈浓度依赖性。与空白对照组相比，单纯放射线照射组及联合治疗组细胞增殖均受到抑制（P<0.05），且前者G2/M期细胞比例明显增加（P<0.05），后者S期及G2/M期细胞比例均显著增加（P<0.05）。与单纯放疗组相比，联合干预使CNE1和CNE2细胞增殖受到更明显地抑制（P<0.01）。与对照组相比，放射线照射导致细胞凋亡率明显增加（P<0.05）；而联合治疗组与单纯放疗组和空白对照组相比，联合干预使CNE1和CNE2细胞凋亡率明显增加，组间差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论紫草萘醌衍生物SYUNZ4联合放射线照射能显著抑制人NPC细胞的增殖，并导致NPC细胞周期阻滞和诱导凋亡。

摘要:目的构建人凋亡抑制蛋白（human inhibitor of apoptosis protein2，hIAP-2）的shRNA，靶向抑制hIAP2基因联合放疗，探讨其对CNE1鼻咽癌细胞株放射敏感性的影响。方法首先采用MTT法确定最佳放射剂量；再构建4条hIAP-2shRNA沉默片段并用脂质体法转染CNE1细胞，最后采用实时荧光定量PCR（QPCR）和免疫印迹法（Western blot, WB）筛选出最佳沉默shRNA序列；用最佳沉默shRNA序列转染CNE1细胞，分别设置转染放射线照射组与未转染放射线照射组，采用实时定量PCR和WB检测hIAP2的基因及其蛋白表达；流式细胞术测细胞凋亡，transwell测细胞侵袭能力。结果MTT法明确4 Gy为最佳放射剂量；QPCR和WB检测结果显示4条hIAP2shRNA均能有效抑制hIAP-2 mRNA及蛋白表达(P<0.05)，以hIAP-2shRNA2沉默效果最显著(P<0.05)；QPCR和WB检测结果显示转染hIAP2shRNA2后照射组与未转染hIAP2shRNA2照射组的CNE1细胞中hIAP-2基因与蛋白表达比较，差异具有统计学意义(P<0.05)；流式细胞术检测结果显示转染hIAP-2shRNA2后照射组比未转染hIAP-2shRNA2照射组凋亡率差异具有统计学意义（P<0.05）；transwell检测结果显示转染hIAP2shRNA2后照射组与未转染hIAP-2shRNA2照射组侵袭能力差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论转染hIAP-2基因沉默后放射可增加鼻咽癌细胞凋亡率，降低其侵袭能力，能够起到放疗增敏作用。

摘要:目的 探讨重组人内皮抑素（rh-endostatin，rh-ES）对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡的影响。方法 分别以25、50、100、200、400 μg/ml的rh-ES体外处理人鼻咽癌细胞株CNE2，同时设空白对照组和细胞对照组。利用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测不同浓度和时间rhES作用下的细胞增殖状态；流式细胞仪检测细胞周期及凋亡；透射电镜观察CNE2细胞超微结构的变化。结果 ① MTT检测显示rhES（25~400 μg/ml）能抑制CNE2细胞的增殖，不同浓度的rhES对人鼻咽癌细胞株CNE2具有不同程度的生长抑制作用，且存在时间剂量效应，以400 μg/ml rhES 作用72 h后抑制效果最为显著，各浓度组相比差异具有统计学意义。②流式细胞仪检测结果发现与CNE2细胞对照组相比，rhES实验组处于细胞周期G0/G1期的细胞明显增多，细胞凋亡率增加（P<0.05）。③电镜观察，rhES实验组CNE2细胞出现凋亡特征，细胞和细胞器皱缩，核染色质边集碎裂，核膜消失。结论 rh-ES能显著抑制鼻咽癌细胞CNE2细胞的增殖，并具有时间剂量依赖性，其主要机制可能为诱导细胞凋亡，调整细胞周期分布。

摘要:目的 探讨PinX1基因在鼻咽癌细胞中的表达及其作用效应分析。方法 构建包含全长人PinX1基因序列的质粒载体pEGFPC3PinX1及PinX1的小干扰RNA ，PinX1FAMsiRNA。脂质体法转染人鼻咽癌58F细胞，采用RTPCR检测PinX1基因和端粒酶催化亚单位（hTERT） mRNA的表达；分别采用 Stretch PCR、MTT及流式细胞仪检测肿瘤细胞端粒酶活性、增殖能力及凋亡改变。结果 成功构建PinX1基因质粒载体及合成其小干扰RNA。转染鼻咽癌5-8F细胞后， PinX1 mRNA的表达水平显著提高， hTERT mRNA的表达水平下降了29.9%，端粒酶活性显著降低，肿瘤细胞增殖能力受到抑制，诱导鼻咽癌细胞凋亡率从未转染的19.27%±0.76%增加至转染后的49.73%±2.70%（P<0.05）；转染PinX1基因的小干扰RNA（PinX1FAMsiRNA），结果显示PinX1 mRNA的表达水平下降70%，而鼻咽癌58F细胞的增殖能力、端粒酶活性和hTERT的表达以及细胞凋亡率未受到显著影响 结论 外源PinX1基因可在鼻咽癌细胞中高表达，显著抑制该肿瘤细胞中端粒酶活性及其hTERT mRNA表达，抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导肿瘤细胞凋亡增加。沉默鼻咽癌细胞中PinX1基因后，PinX1基因的抑制性功能相应地受抑制。施加正反调节因素后的结果表明PinX1基因是一个潜在的端粒酶活性抑制剂，可能通过靶向抑制端粒酶途径来影响肿瘤的发生发展，本研究将为鼻咽癌的靶向基因治疗开辟新领域。