摘要:目的:探讨hTERT启动子及CMV增强子双调控机制的增强型表达载体pGL3basicEGFPTKhTERTpCMV enhancer在鼻咽癌细胞中的靶向杀伤效应。方法:构建靶向性增强型hTERT启动子及CMV增强子双调控TK表达载体pGL3basicEGFPTKhTRETpCMV enhancer，并以单启动子载体pGL3basicEGFPTKhTRETp作为对照组，分别转染端粒酶阳性的人鼻咽癌细胞株58F、人乳腺癌细胞MCF7（阳性对照）及正常人血管内皮细胞ECV（阴性对照）。荧光显微镜下观察其TK基因绿色荧光蛋白表达，实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中TK基因mRNA定量表达差异，Stretch PCR法检测肿瘤细胞端粒酶活性，MTT法分析杀灭鼻咽癌细胞的效果等作为检验指标。结果:①该增强型表达载体转染58F细胞及MCF7细胞后的绿色荧光表达及TK基因的mRNA表达均强于单启动子pGL3basicEGFPTKhTRETp组；而ECV细胞只有极微弱的绿色荧光和极弱的TK基因的mRNA表达。实时荧光定量PCR显示，增强型载体组A值较对照组单启动子组明显增高，是单启动子组的2~5倍。Stretch PCR法检测转染前后58F细胞端粒酶活性明显被抑制。②加入GCV后增强载体组对鼻咽癌58F 细胞及乳腺癌MCF 7细胞体外增殖均有明显抑制作用，均高于单启动子载体组、不加GCV的增强型载体组、空载体组及空白对照组。结论:以hTERT启动子及CMV增强子双调控机制介导TK基因的新型靶向增强型表达载体能够高效靶向性杀灭鼻咽癌细胞，这种新型高效靶向增强型载体有可能成为一种针对包括鼻咽癌在内的具有较为广泛抗癌谱的恶性肿瘤临床靶向基因治疗的新策略。